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BIOCHANNEL 培养建议 | 人胚肾细胞

227 人阅读发布时间:2024-07-19 13:57

HEK-293A 人胚肾细胞

293A细胞是众多293细胞系列的一个亚克隆,因其具有相对扁平的形态和良好的贴壁能力而得名(A是adhesion首字母)。该细胞含有一个稳定整合的E1基因拷贝,能够提供生成重组腺病毒所需的E1蛋白(包括E1a和E1b蛋白),故它常被用于腺病毒的初始生产、扩增和滴定。在培养过程中,该细胞呈现单层的扁平形态,没有明显的细胞重叠和细胞空隙(hole),这使得病毒滴定和空斑测定(plaque assay)更为容易。

293FT 人胚肾细胞

该细胞来源于用 SV40 大T抗原转化的人胚胎肾细胞 293F(F是 Fast-growth 的首字母),是一种快速生长、高度可转染的克隆分离株。它是制备 高滴度慢病毒的良好宿主,能够稳定表达 pCMVSPORT6TAg.neo 质粒中的 SV40 大T抗原,且大 T 抗原的表达受到人类巨细胞病毒(CMV)启动子的控制,表 达水平较高。此外,该细胞还可稳定表达新霉素抗性基因,且新霉素抗性基因的 表达受到 SV40 增强子/启动子的控制,因此可用含有 0.5 mg/ml G418 的培养基 中维持培养。

HEK-293T 人胚肾细胞

HEK-293T细胞是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于转染实验,转染效率较高。(转染一般以50%密度铺板,待细胞刚刚贴到皿壁上后(一般8-10小时),即可进行转染操作)

HEK-293 人胚肾细胞

尽管较早的报道说这株细胞包含腺病毒5 DNA病毒基因组的左端和右端,现在已经清楚只存在左端序列。这株细胞适于滴定人腺病毒。细胞表达一种不寻常的由整联蛋白beta-1亚基和玻联蛋白alpha-v亚基组成的玻联蛋白细胞表面受体。Ad5插入片段进行了克隆和测序,结果表明碱基1-4344插入到了19号染色体(19q13.2)

培养建议

细胞生长快,通常倍增时间不到16~24h,每2-3天1:4~1:6传代,细胞融合度达到80%即可传代。

细胞贴壁不牢,胰酶消化时间室温15~30秒;吹打动作尽量轻柔,避免出现过多气泡

需要注意的是,血清批间差容易导致293T细胞的状态差异,尽可能选择稳定优质的同批次血清。为避免运输过程中震荡导致293T细胞漂浮,产品出库时放低了细胞密度,若收到货后细胞密度较低,建议当天倒掉灌装培养基或离心收集细胞,更换新鲜的完全培养基培养至细胞密度90%以上再传代。

细胞传代处理后的第二天,在显微镜下观察细胞状态,如死细胞较多且细胞密度较低,需要进行换液操作,也可视情况稳定。

该细胞贴壁能力较弱,细胞生长不能过密,过密细胞容易脱落,脱落下来的细胞可以通过离心收集,继续培养。

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