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南京森贝伽生物科技有限公司品牌商
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自营
Sbjbio
试剂/耗材/技术服务
已认证品牌介绍
京森贝伽生物科技有限公司（NanJing SenBeiJia Biotechnology Co.,LTD.），是一家集研发、生产、销售为一体的高新技术企业，专注于生命科学和生物技术研究，产品涵盖分子生物学、蛋白质组学、免疫学、细胞生物学等研究和应用领域。公司总投资超过 2000 万元，并先后引进了自动化设备，组建了专业的研发技术团队。凭借着洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统，为生产高质量的产品提供了有效保证。森贝伽生物自主研发的 ELISA 试剂盒，在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员的好评，先后在权威杂志文章中被引用。
代理
Santa Cruz
抗体
已认证品牌介绍
SANTA CRUZ公司是全球最大的抗体生产厂商之一，目前公司提供二万余种研究用的第一抗体，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白分子量Marker，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。
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京森贝伽生物科技有限公司（NanJing SenBeiJia Biotechnology Co.,LTD.），是一家集研发、生产、销售为一体的高新技术企业，专注于生命科学和生物技术研究，产品涵盖分子生物学、蛋白质组学、免疫学、细胞生物学等研究和应用领域。公司总投资超过 2000 万元，并先后引进了自动化设备，组建了专业的研发技术团队。凭借着洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统，为生产高质量的产品提供了有效保证。森贝伽生物自主研发的 ELISA 试剂盒，在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员的好评，先后在权威杂志文章中被引用。
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抗体
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SANTA CRUZ公司是全球最大的抗体生产厂商之一，目前公司提供二万余种研究用的第一抗体，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白分子量Marker，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。
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京森贝伽生物科技有限公司（NanJing SenBeiJia Biotechnology Co.,LTD.），是一家集研发、生产、销售为一体的高新技术企业，专注于生命科学和生物技术研究，产品涵盖分子生物学、蛋白质组学、免疫学、细胞生物学等研究和应用领域。公司总投资超过 2000 万元，并先后引进了自动化设备，组建了专业的研发技术团队。凭借着洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统，为生产高质量的产品提供了有效保证。森贝伽生物自主研发的 ELISA 试剂盒，在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员的好评，先后在权威杂志文章中被引用。
代理
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SANTA CRUZ公司是全球最大的抗体生产厂商之一，目前公司提供二万余种研究用的第一抗体，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白分子量Marker，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。
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公司新闻/正文
森贝伽 Western Blot 样品处理方法
1797 人阅读发布时间：2021-06-22 14:10
Western Blot 样品处理方法
1．培养的细胞（定性）：
(1) 去培养液后用温的 PBS 冲洗 2~3 遍（冷的 PBS 有可能使细胞脱落）。
(2) 对于 6 孔板来说每孔加 200~300μl ，60~80℃ 的 1×loading buffer。
(3) 100℃，1min。
(4) 用细胞刮刮下细胞后在 EP 管中煮沸 10min，期间 vortex 2~3 次。
(5) 用干净的针尖挑丝，如有团块则将团块弃掉，如果没有团块但有拉丝现象，则可以将 EP 管置于 0℃后在 14000~16000g 离心 2min，再次挑丝。若无团块也无丝状物但溶液有些粘稠，可通过使用 1ml 注射器反复抽吸来降低溶液粘滞度，便于上样。
(6) 待样品恢复到室温后上样。
2．培养的细胞（定量）：
(1) 去培养液后用温的 PBS 冲洗 2~3 遍（冷的 PBS 有可能使细胞脱落）。
(2) 加入适量的冰预冷的裂解液后置于冰上 10~20min。
(3) 用细胞刮刮下细胞，收集在 EP 管后超声（100~200w）3s ，2 次。
(4)12000g 离心，4℃，2min 。
(5) 取少量上清进行定量。
(6) 将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀后加 loading buffer 后直接上样最好，剩余溶液（溶于 1×loading buffer）可以低温储存，-70℃ 一个月，-20℃ 一周，4℃ 1~2 天，每次上样前 98℃，3min。
3．组织：
(1) 匀浆对于心肝脾肾等组织可每 50~100mg 加 1ml 裂解液，肺 100~200mg 加 1ml 裂解液。可手动或电动匀浆。注意尽量保持低温，快速匀浆。
(2)12000g 离心，4℃，2min。
(3) 取少量上清进行定量。
(4) 将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀加 loading buffer 后直接上样最好，剩余溶液（溶于 1×loading buffer）可以低温储存，-70℃一个月，-20℃一周，4℃1~2 天，每次上样前 98℃，3min。
(裂解液配方：Tris-Cl(pH7.4)20mM，EDTA1mM 由于蛋白酶抑制剂可影响蛋白定量，且新鲜蛋白很少降解，故可不加，如加按建议比例即可。提取磷酸化的蛋白还需加 Na3VO40.1mM 及 NaF25mM）。
(1×loading buffer 配方：10% 甘油，50mMTris·Cl(pH6.8)，2%β-巯基乙醇，0.2~0.5‰溴酚蓝，2% 或 5% 的 SDS。Buffer 可配成 2×~5×，注意 SDS 终浓度勿超过 10%。对于心脏，肌肉等碎屑较多的组织可用 5% 的 SDS，肝肾等组织 2% 即可。)
(2)12000g 离心，4℃，2min。
(3) 取少量上清进行定量。
(4) 将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀加 loading buffer 后直接上样最好，剩余溶液（溶于 1×loading buffer）可以低温储存，-70℃一个月，-20℃一周，4℃1~2 天，每次上样前 98℃，3min。
(裂解液配方：Tris-Cl(pH7.4)20mM，EDTA1mM 由于蛋白酶抑制剂可影响蛋白定量，且新鲜蛋白很少降解，故可不加，如加按建议比例即可。提取磷酸化的蛋白还需加 Na3VO40.1mM 及 NaF25mM）。
(1×loading buffer 配方：10% 甘油，50mMTris·Cl(pH6.8)，2%β-巯基乙醇，0.2~0.5‰溴酚蓝，2% 或 5% 的 SDS。Buffer 可配成 2×~5×，注意 SDS 终浓度勿超过 10%。对于心脏，肌肉等碎屑较多的组织可用 5% 的 SDS，肝肾等组织 2% 即可。)