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南京森贝伽生物科技有限公司品牌商
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京森贝伽生物科技有限公司（NanJing SenBeiJia Biotechnology Co.,LTD.），是一家集研发、生产、销售为一体的高新技术企业，专注于生命科学和生物技术研究，产品涵盖分子生物学、蛋白质组学、免疫学、细胞生物学等研究和应用领域。公司总投资超过 2000 万元，并先后引进了自动化设备，组建了专业的研发技术团队。凭借着洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统，为生产高质量的产品提供了有效保证。森贝伽生物自主研发的 ELISA 试剂盒，在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员的好评，先后在权威杂志文章中被引用。
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已认证品牌介绍
SANTA CRUZ公司是全球最大的抗体生产厂商之一，目前公司提供二万余种研究用的第一抗体，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白分子量Marker，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。
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公司新闻/正文
总蛋白的两种不同提取方法
688 人阅读发布时间：2016-12-06 17:29
总蛋白的两种不同提取方法
南京森贝伽产品正在火热促销中，主营产品有ELISA试剂盒、血清、细胞株、培养基、标准品、染色液、抗体等，我司与各大高校医院均有合作。产品价格优惠，质量保证，产品买的多折扣就多，另有礼品赠送，欢迎来电订购！本公司产品仅用于科研使用，不供临床实验。蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。本文分别介绍了从新鲜样品中提取总蛋白和从Trizol裂解液中分离总蛋白的方法和步骤。希望与各位老师和同学交流。
膜蛋白具有多种功能，在细胞识别、细胞信号转导、运输等有着中着重要的角色，因此也是极佳的药物靶点。抽提膜蛋白主要是进行蛋白组分析：常用的实验是非变性胶电泳、酶活分析、SDS-PAGE、western blot等。本文叙述了总蛋白的抽提方法和膜蛋白的提取方法。
一、从新鲜样品中提取总蛋白(简易法)
1、自配裂解液(pH 8.5-9.0)：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用;用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western Blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白
1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯纺分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min， 2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。
6、替代方案：将3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中，在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次，1000g离心10min去除沉淀，上清可直接用于蛋白实验。